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分子生物学技术miRNA

  • 质粒提取

    一、实验原理提取质粒DNA的方法有很多种,从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取,从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取,从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等,各种不同的方法各有其优缺点,根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。二、实验方法(1)碱裂解提取......

    2018-05-10
  • 质粒与构建载体

    一、质粒绝大多数的生物都是以DNA的形式来储藏其遗传信息,遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori,originofreplication,或译为复制起点),使整个基因体得以复制。环状质粒的复制形式主要分theta(θ)及rollingcircle两种,基因体的复制都是由复制原开始。二、质粒......

    2018-05-10
  • 原位PCR技术详解,你知多少?

    原位PCR简介原位PCR技术的基本原理,就是将PCR技术的高效扩增与原位杂交的细胞定位结合起来,从而在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定的DNA或RNA序列。原位PCR技术成功地将PCR技术和原位杂交技术结合起来,保持了两项技术的优势又弥补了各自的不足。原位PCR技术的待检标本一般先经化学固定,以保......

    2018-03-12
  • 核酸的抽提---mRNA的分离技巧

    与rRNA和tRNA不同的是,哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾,因此可以用oligo(dT)-纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等,1971;AtLeder,1972)。在构建cDNA文库时,必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行Northern杂交或Sl核酸酶作用图分析时,与总RNA相比,采用poly(A)+RNA能......

    2018-02-28
  • 质粒DNA提取

    实验方法原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步:①细菌的培养和质粒的扩增②细菌菌体的裂解③质粒DNA的纯化实验材料大肠杆菌试......

    2017-11-23
  • 交联染色质免疫共沉淀(X-ChIP)实验设计

    ChIP是一种强大的确定蛋白或者组蛋白修饰在基因组上定位的实验方法。染色质被分离出来后采用抗体与抗原的结合来判定目的蛋白是否结合在特定的DNA序列上或者判定目的蛋白结合位点在全基因组范围的分布(微阵列或DNA序列)。这种方法具有空间性与时效性。该实验设计为如何在细胞中进行ChIP实验提供......

    2017-11-30
  • 基因枪活体植物基因转染

    本实验所用基因传递系统(基因枪)原理:低压基因递送系统(GDS-80基因枪U.S.PatentNumber:6,436,709B1),根据火箭喷嘴原理和空气动力学原理设计,是用于传递生物微粒进入靶细胞的一种新型系统。如图1中所示,当左侧出现输入气体压力时(如:氦气),两个腔室之间将形成巨大的压力差,一旦该气体穿过装载样品的咽喉处,G......

    2017-11-13
  • 基因芯片技术

    基因芯片检测原理杂交信号的检测是DNA芯片技术中的重要组成部分。以往的研究中已形成许多种探测分子杂交的方法,如荧光显微镜、隐逝波传感器、光散射表面共振、电化传感器、化学发光、荧光各向异性等等,但并非每种方法都适用于DNA芯片。由于DNA芯片本身的结构及性质,需要确定杂交信号在芯片上的......

    2017-11-08
  • 双向电泳

    双向电泳(two-dimensionalelectrophoresis)是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合,即先进行等电聚焦电泳(按照pI分离),然后再进行SDS-PAGE(按照分子大小),经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图......

    2017-10-31
  • 扫描电镜

    扫描电子显微镜的制造是依据电子与物质的相互作用。当一束高能的入射电子轰击物质表面时,被激发的区域将产生二次电子、俄歇电子、特征x射线和连续谱X射线、背散射电子、透射电子,以及在可见、紫外、红外光区域产生的电磁辐射。同时,也可产生电子-空穴对、晶格振动(声子)、电子振荡(等离子体)。原则......

    2017-10-28
  • 载体构建与分子克隆

    载体构建(vectorconstruction)是把连接好的DNA分子运送到受体细胞中去。首先,必须寻找一种能进入细胞、在装载了外来的DNA片段后仍能照样复制的运载体。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因......

    2017-10-27
  • 蛋白互作研究技术

    荧光能量共振转移(FRET)检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具,广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。原理当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠,并且两个分子的距离在10nm范围以内时,就会发生一种非放射性的能量转移,即FRET现象,使得......

    2017-12-02
  • RNA印迹杂交

    Northern印迹杂交(Northernblot)。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。DNA印迹技术由Southern于1975年创建,称为Southern印迹技术,RNA印迹技术正好与DNA相对应,故被称为Northern印迹杂交,与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Westernblot。预备:1.按下述步骤,每泳道加10~20μg总R......

    2017-10-24
  • PAT法分析mRNA

    实验方法原理PAT法[PCRpoly(A)test]可以快速、灵敏地从总RNA中分析特异mRNA,而且可以定量估算RNApoly(A)尾长度。这方法中,包括cDNA合成的整个操作过程都在一个反应管中完成,不仅操作更简便,也减少了可能存在的RNase污染。尤其是PATcDNA合成后非常稳定,并可重复使用,该方法的易操作性及灵敏度使其可......

    2017-10-23
  • 呼吸道合胞病毒空斑实验方法汇总

    传统的空斑实验方法测呼吸道合胞病毒的PFU值,由于其空斑形成较小,且需要借助特异性的表面融合蛋白抗体来确定,故操作繁琐,费用较高。这里介绍给大家三种简单易行的空斑形成实验操作方法:中洪博元实验1、以5×10e5/ml的密度接种Hep-2细胞到6孔板中,每孔加入3ml细胞悬液;2、待细胞长成单层后(不得超......

    2017-10-23
  • Northern blot

    A、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。含有乙二醛-DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳,因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率(Miller,1987),但用含朋乙二......

    2017-10-20
  • 东洪简介技术平台实验方法科研成果行业动态公司新闻

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