一、实验原理

提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。

二、实验方法

（1）碱裂解提取法:

1:接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2mlLB培养基。

2:37℃振荡培养过夜。

3:取1.5ml菌体于Ep管(离心管)，以4000rpm离心3min，弃上清液。

4:加0.lml溶液I(1%葡萄糖，50mM/LEDTA pH8.0，25mM/LTris-HCl pH8.0)充分混合。

5:加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH，1%SDS)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5min.

6:加入0.15m1预冷溶液III(5mol/LKAc，pH4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5min.

7:以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管

8:加入等体积的异戊醇，混匀后静置10min.

9:以10，000rpm离心20min，弃上清。

10:用70%乙醇0.5ml洗涤一次，抽干所有液体。

11:待沉淀干燥后，溶于50ulTE缓冲液中(或60℃温育去离子水）

（2）抽提窍门

1:加溶液II(裂解液)后，操作一定要温和，剧烈混合会导致基因组DNA污染。

2:洗脱时60℃温育(Ellution Buffer)洗脱缓冲液或去离子水效果更好。

3:若质粒提取含量低，可增加菌液样或换用ArtMedia Plasmid Culture，其比LB培养基质粒得量高

4:菌体应彻底悬浮，如果没有彻底悬浮菌体，则残留的菌体团块在溶液 II 加入后，变成难以完全裂解的团块。这个团块在溶液 III 加入后，会有一部分蛋白质继续存在于溶液中，成为蛋白质残留的最大根源。

5:加入溶液 II 后，混匀，体系最好能立即变得清澈。体系如果变得清澈了，马上加入溶液 III 中和。

6:中和的操作，在 1.5ml 离心管中加入溶液 III 后，先颠倒两次，使管底朝上，用指头弹击管底数次，再颠倒混匀。此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析