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分子生物学技术miRNA

质粒与构建载体

一、质粒

       绝大多数的生物都是以DNA 的形式来储藏其遗传信息遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori, origin of replication,或译为复制起点),使整个基因体得以复制。环状质粒的复制形式主要分theta (θ)及rolling circle两种基因体的复制都是由复制原开始。

二、质粒载体

       载体的主要功能在基因选殖(cloning),选殖的目的是分离、纯化及繁殖特定的基因;质粒载体的基本条件是:1.它们是复制体,能生生不息地被复制;2.它们有适当的标示基因,可供做转形株(transformant)和非转形株(non-transformant)的辨识;3.它们有另一组具有限制单切点的标示基因,可供插入外来基因并做为选殖株(clone)和非选殖株(non-clone)的辨识。此外它们的基因体要小,以便于操作和细胞转形。环状质粒的复制形式主要分theta (θ)及rolling circle两种基因体的复制都是由复制原开始。

三、载体的利用

        载体的种类繁多,当你需要利用载体时,你必须清楚你的目的。载体与宿主的搭配也非常重要,必须了解它们的特性与基因标示才能得心应手的运用。在我们已经完成大肠杆菌中的基因选殖、鉴定及定序等工作后,选殖的基因总要送回原来的生物细胞或生物体中才有意义,然而绝大多数的大肠杆菌载体是无法在其它生物细胞中生存的。为了克服这种困难,于是人们纷纷切下包括动、植物及其它各种原核生物的质粒复制原、病毒复制原、染色体复制原,甚至染色体的部分DNA ,将之插入大肠杆菌载体中,再配上其它适当的启动子,如此构建载体不但可以用来转形大肠杆菌以外的细胞并且可以在这些细胞

中做适当的基因表达。

(本文转载丁香园)

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