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  • 附2:探针的选择与标记(续)

    1.DNA和RNA探针其原理是克隆一段特异的DNA或RNA片段,装载到相应的质粒中。经过质粒扩增,酶解和纯化等步骤,就可以得到大量的DNA和RNA片段。更好的解决办法是直接购买纯化好的探针,其次是获得一装载好特异性DNA或cDNA片段的质粒。目前在国际国内都有商品化的DNA探针供应,这些探针已经严格纯化和定量......

    2018-08-01
  • 细胞中mRNA原位杂交技术(六)

    附2:探针的选择与标记1.探针选择特异性的探针必须是一段已知的基因片段。相对于膜上杂交而言,原位杂交有特殊性。即细胞和组织中的待测基因隐藏于类似于网络状的立体结构之中,给探针的进入带来明显的影响。探针能接触到靶分子对原位杂交尤为重要。理想的探针应满足下列要求:适当的探针长度。能对......

    2018-07-26
  • 细胞中mRNA原位杂交技术(五)

    附表1:部分试剂配制10.1mol/L三乙醇胺-0.25%乙酸酐:三乙醇胺13.2ml,氯化钠5g,浓盐酸4ml,DEPC水定容至约1000ml,临用前,一边摇动溶液一边加入乙酸酐2.5ml,充分混合。210×PBS:氯化钠80g,Na2HPO4·12H2O232.3g,NaH2PO4·2H2O24.5g。加DEPC水900ml,用HCl/NaOH调pH至7.2,最后定容为1000ml。320×SSC(pH=7.0):氯化......

    2018-07-24
  • 细胞中mRNA原位杂交技术(四)

    1原位杂交固定的目的是为了保持细胞结构,最大限度地保存细胞内DNA或RNA的水平,使探针易于进入细胞或组织。DNA较稳定,RNA易被酶解,在RNA定位上,若要使RNA的降解减少到最低限度,取材后应尽快予以冷冻或固定。2玻片包括盖片和载玻片用热肥皂水刷洗,自来水清洗干净后,置于清洁液中浸泡24h,清水洗净烘干,95%......

    2018-07-17
  • 细胞中mRNA原位杂交技术(三)

    实验步骤:mRNA原位杂交二.杂交与显色1、将加入探针的杂交液先于50℃预热,均匀涂于切片表面,加上硅化盖玻片,放于湿盒中,50℃孵育12-16h。2、1×SSC(含50%甲酰胺),50℃洗涤2次,每次10min。3、2×SSC(含50%甲酰胺),37℃洗涤10min。4、2×SSC(0.5ug/mlRNaseA),37℃洗涤30min。5、1×SSC,50℃洗涤10min。6、1×PBS(......

    2018-07-14
  • 细胞中mRNA原位杂交技术(二)

    实验原理及技术背景1:原位杂交组化(ISHH)属于分子杂交的一种,是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交,再应用标记物的检测系统,在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术。原位杂交的本质就是在一定的温度和离子浓度下,使其有特异序列的单链探针通过碱基互补配对规则与组织细胞内待测的核......

    2018-07-11
  • 荧光定量PCR

    荧光定量PCR(realtimefluores-cencequantitativePCR,RTFQPCR)是1996年由美国AppliedBiosystems公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。qRT-PCR检测......

    2018-07-06
  • DNA甲基化检测

    (DNAmethylation)DNA甲基化是最早发现的修饰途径之一,大量研究表明,DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达。......

    2018-07-06
  • 定点突变

    定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征,是基因研究工作中一种非常有用的手段。PCR扩增客户须知:1.客户需提供含......

    2018-07-06
  • 载体构建

    载体构建(vectorconstruction)是把连接好的DNA分子运送到受体细胞中去。首先,必须寻找一种能进入细胞、在装载了外来的DNA片段后仍能照样复制的运载体。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因......

    2018-07-06
  • Western-blot

    蛋白质印迹法即WesternBlot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。蛋白印迹法......

    2018-07-06
  • 甲基化检测方法

    一.服务介绍基本原理在于:样本经亚硫氢酸盐处理后,甲基化的胞嘧啶(C)保持不变,但非甲基化的胞嘧啶被转化成脲嘧啶,因此在利用该处理产物作为模板的PCR产物中,甲基化的胞嘧啶还是胞嘧啶,但非甲基化胞嘧啶变成了脲嘧啶(胸腺嘧啶),此时检测到的胞嘧啶(C)即是样品中本身的甲基化位点二.实验方法以及步骤......

    2018-07-06
  • 原位杂交

    一.服务介绍原位杂交原理在细胞或组织结构保持不变的条件下,使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针,按核酸杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测,从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。二.实验方法和步骤原......

    2018-07-06
  • DNA纯化实验

    一.服务介绍DNA纯化可以:(1)获得高纯度的DNA;(2)浓缩DNA;(3)用于测序、遗传信息分析等分子生物学应用。二.实验原理以及器材。实验方法原理:硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性,所以被......

    2018-07-06
  • 线粒体和液泡系的超活染色与观察

    一.服务内容线粒体活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。其目的是显示生活细胞内的某些结构,而不影响细胞的生命活动和产生任何理化变化以致引起细胞死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。根据所用染色剂的性质和染色方法的不......

    2018-07-06
  • 细菌基因组DNA的提取方法

    一.服务介绍细菌基因敲除实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋......

    2018-07-06
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