实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳......

inverse-PCR是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多，而Inverse-PCR一般只要有特异条带，基本上就是目的片段。基本步骤如下：1、反向PCR（InversePCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。a.选择合适的限制性内切酶位点。并在T-DNA的边界（左边界、......

双向电泳（twodimentionlalgelelectrophoresis,2-DE)技术，特别是以固相pH梯度等电聚焦为第一向的双向电泳技术是当前分辨率最高，信息量最大的电泳技术。试剂、试剂盒：尿素去污剂仪器、耗材：聚丙烯酰胺凝胶实验步骤一、第一向1.等电聚焦凝胶的准备双向电泳通常用聚丙烯酰胺凝胶作介质，但需含有8mol/L......

荧光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则通过共转染的"对照"作为内参为试验提供一基准线，从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数......

Methods2.1.MaterialandreagentsDuolbecco'sphosphatebufferedsaline(PBS),Medium199withEarle'ssaltsand25mMHEPES,collagenaseTypeII(fromClostridumhistolyticum),antibiotic/antimyoticsolutuion(containing10,000Upenicillin,10,000µgstreptomycin,25µgamphotericinBpermlinsaline)and......

质粒DNA提取可以：（1）快速纯化质粒；（2）用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。SDS碱裂解法（试剂盒提取）实验方法原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工......

基本原理TNF的生物学活性之一是能直接杀伤肿瘤细胞。TNF与相应受体结合后向细胞内移，被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低，各种酶外泄，引起细胞溶解。肿瘤细胞株对TNF-α的敏感性有很大的差异，用放线菌素D、丝裂酶素C、放线菌酮等处理肿瘤细胞，可明显增强TNF-α杀伤肿瘤细胞活性。材料和试剂1，......

一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。2.掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。二、实验原理PCR技术，即聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）是由美国PECetus公司的KaryMullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建立的。这项技术可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍，这种迅速......

其他一、PCR反应的关键环节1.模板核酸的制备。2.引物的质量与特异性。3.酶的质量。4.PCR循环条件。二、PCR常见问题及对策1.假阴性，不出现扩增条带（1）模板原因①模板中含有杂蛋白质。②模板中含有Taq酶抑制剂。③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白。④在提取制备模板时丢失过多，或......

四、PCR反应条件的控制1.PCR反应的缓冲液提供合适的酸碱度与某些离子。2.镁离子浓度总量应比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。3.底物浓度dNTP以等摩尔浓度配制，20～200umol/L。4.TaqDNA聚合酶2.5U(100ul）。5.引物浓度一般为0.1～0.5umol/L。6.反应温度（1）变性温度和时间95℃，30s。（2）退火温度和时间低于引物......

PCR技术可用于：（1）检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态；（2）有效检测癌基因的突变，准确检测癌基因的表达量；（3）临床应用于检测地中海贫血的基因突变。实验方法原理PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构......

一、蛋白质盐析分离的原理：蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增大而上升(盐溶)，当盐浓度增大到一定数值时，其溶解度又逐渐下降直至蛋白质析出。盐析的发生是由于盐浓度增大到一定数值时使水活性降低，导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，引起蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中......

蛋白质（protein）是有机大分子，是构成细胞的基本有机物和生命活动的主要承担者。蛋白质在催化生命体内各种反应进行、新陈代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用。蛋白质的一级结构是氨基酸序列，通过鉴定氨基酸序列来匹配它的蛋白质，这是定性研究，是蛋白质组学的基础，也是......

讲起通用电气医疗集团(GEHealthcare)也许生物方面的研究人员会比较陌生，这个从爱迪生的灯泡讲起，拥有百年历史的大集团包括许许多多的行业（当然也不要盲目崇拜把通用汽车也归到旗下，GM会生气的），可是讲起蛋白纯化等领域首屈一指的安玛西亚；特别是ECL系列和当年的法玛西亚的Sepharose、Sephadex等大名......

基因检测基因枪法(Genegun)又称粒子轰击、高速粒子喷射技术或基因枪轰击技术，是由美国Comel大学生物化学系John.C.Santord等于1983年研究成功。首先在植物中获得成功应用。通过动力系统将带有基因的金属颗粒(金粒或钨粒)，将DNA吸附在表面，以一定的速度射进靶细胞，实现稳定转化的目的。小颗粒穿透......

PCR检测⒈核酸片段的大小:用于SSCP分析的核酸片段越小，检测的敏感性越高。对于<200bp的片段，SSCP可发现其中70％的变异；对于300bP左右的片段则只能发现其中50％的变异；而＞500bp的片段，则仅能检出10％～3O％的变异，因此，<300bP，尤其是150bP左右的核酸片段更适于SSCP分析。对于大于400bp的PCR产物就需要设法进一步......