1.MSP原理：MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，然后用3对特异性的引物对所测基因的同一核苷酸序列进行扩增。扩增产物用DNA琼脂糖凝胶电泳，凝胶扫描观察分析结果。此原理的关键在于3对......

一、目的基因的获得目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（pcr）或......

实验方法原理纯化RNA硫氰酸胍能溶解细胞并使蛋白变性.当用于抽提缓冲液时，可产生无RNase的环境□组织抽提后，以中等转速离心匀浆液，以除去小溶性多搪。用苯酚：氯仿将上清液抽提出，RNA位于水相，DNA和蛋白质位于苯酚相和两相交界面。用乙酸钾将位于水相的多糖选择件的沉淀出来，然后用氯化锂选择性地将R......

目前构建重组腺病毒系统的策略，主要有三种1)体外直接连接(clontech的ADENO-X系统)2)在细菌中重组的策略(adeasy系统)3)在293细胞中重组的策略（AdMax系统）国家人类基因组北方研究中心通过与美国VectorBiolab公司合作开发出了一套不同于以上策略的新的重组腺病毒系统。通过这套系统，实现了重组腺病......

miRNA和siRNA的基本介绍及区别RNA干涉（RNAi）在实验室中是一种强大的实验工具，利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的目标基因的沉寂，迅速阻断基因活性。SiRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是对特定信使RNA（mRNA）进行降解的指导要素。siRNA是RNAi途径中的中间产物，是RNAi发挥效应所必需的因子。siR......

慢病毒包装简要步骤以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。1.取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔混匀，室温孵育5min。2.取1.5ml灭菌EP管，取9μl脂质体2000l溶于250μl无血清培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。3.将DNA溶液和脂质......

一、干扰慢病毒1.shRNA序列设计与合成（1）客户提供干扰序列；（2）针对目的基因中洪代为设计并合成三对特异性的siRNA序列，根据siRNA序列设计对应茎环结构的shRNA序列，然后合成三对shRNA序列（结果中保证其中一条干扰效率不低于70%）。2.shRNA慢病毒载体构建将三个shRNA分别克隆入慢病毒载体，构建shRNA干扰慢......

腺病毒包装1特点：1.1几乎可以感染所有类型的细胞。1.2可以获得复制缺陷型（E1和E3缺失）的腺病毒。1.3病毒滴度高，产生病毒经过浓缩后可以达到1012PFU/mL，能有效地进行增殖。1.4腺病毒载体感染宿主的范围比较广。1.5感染细胞时，不整合到染色体中，不存在激活致癌基因或插入突变等危险，生物安全性高。2原......

试剂：RNA提取缓冲液（CTAB）：2%CTAB（W/V），2%聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100mMTris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置），25mMEDTA,0.5g/L亚精胺Spermidine，2.0MNaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC处理的水配制即可。SSTE：1MNaCl，0.5%SDS（W/V），10mMTr......

实验基本原理RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。只有在变性情况下，RNA分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到1......

一、实验目的学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。二、实验原理RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。只有在变性情况下，RNA分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一......

将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特......

农作物改良，从来都是一个漫长而繁琐的过程，而如今，科学家能够快速轻松地实现。这多亏了一种被誉为"基因剪刀"的CRISPR技术。它是一种灵活高效的基因组编辑工具，能够对几乎任何物种的基因组进行改造。近两年，许多实验室将这种工具应用在动物、植物和微生物上，以期获得更高产、更优质的品种。CRISPR改......

一、PCR技术及步骤聚合酶链式反应（PCR）PCR扩增产物的克隆上述两个实验包含基本原理、步骤、问题等。二、PCR常见问题汇总1.没有得到扩增产物（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。（2）模板含有杂质。特别是对甲醛......

动物体内RNAi药物(siRNA﹑miRNA﹑shRNA等)的一般给药方法与途径一般来说，给药方法可分为全身给药(systemicdelivery)和局部给药(localdelivery)。一、局部给药：迄今已有很多通过局部给药途径进行动物体内RNAi药物药效评价和国外RNA药物I-III期临床试验的报道。给药方式：局部给药是将RNAi药物分子（siRN......

一、碱变性法提取质粒DNA质粒(Plasmid)是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息，可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的pcr技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。分离和......