基因表达无论是从一个胚胎细胞分化为不同的组织器官，或者是从正常的组织突变为肿瘤组织，都可能涉及在同一基因组背景下不同基因的差异性表达。寻找差异表达的基因就有可能揭示细胞分化的机制或者肿瘤的成因，因而也就成为一项热门的技术。寻找差异表达的基因有不少方法，抑制消减杂交（SSH）是比较有效......

PurificationofGSTfusionproteinsinE.coliGSTSugdenlab,McArdleLaboratoryforCancerResearch,UniversityofWisconsin-MadisonMedicalSchoolScreenofGST-FusionProteinExpression(pGEXsystembyAmersham:forcheckclonesforexpressionofthedesiredfusionproteinpriortolarge-scalepurification)P......

通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上，受噬菌体T7强启动子控制；表达由宿主细胞提供的T7RNA聚合酶诱导。当需要表达蛋白时，在细菌培养基中加入IPTG来启动表达。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽"标签"的......

一、原理1、E.coli表达系统E.coli是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E.coli菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE以检测表达蛋白质。2、外源基因的诱导表达提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以......

一、RIP技术简介由于miRNA被发现在癌症机理中起重要的作用，尤其是与肿瘤转移相关联，因此对于miRNA的研究来说，最让人兴奋的是有希望应有于癌症治疗中的RNA抑制疗法或模拟miRNA表达疗法，尤其是对于出现肿瘤转移的癌症病人的治疗。但是miRNA具有成百上千个靶标，所以要完全理解一个miRNA和靶标的特异......

TRIzolRNA提取方法（一）试剂准备1．TRIzol试剂。2．氯仿3．异丙醇4．75%乙醇（DEPCH2O配制）5．DEPCH2O（二）操作步骤1．样品处理：（1）培养细胞：收获细胞1-5×107，移入1.5ml离心管中，加入1mlTrizol，混匀，室温静置5min。（2）组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml离心管中，加入1mlTrizol充分匀浆，室温静置５min......

原位杂交组织(或细胞)化学(InsituHybridizationHistochemistry，ISHH)简称原位杂交(InSituHybridization)，属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同，原位杂交可分为DNA-DNA杂交，DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交三类。根据......

RNA提取心得一组织RNA提取1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2.如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80°或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4°，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，......

材料和试剂1.6cm细胞培养皿(Fiosher).2.人类或小鼠细胞系，细胞试验所需要的生长培养基。3.凝聚胺(海美溴铵;SigmaH9268)4.合适的选择性抗生素。仪器1.细胞培养箱步骤慢病毒感染方法应该根据不同的细胞系和以细胞为基础的试验来进行优化。例如，下列的参数应该在大规模的感染之前进行优化，以确定一......

实验原理质粒是存在于染色体外的小型双链环状DNA，大小在1-200kb之间，能在宿主菌中自主复制。宿主细胞中质粒的拷贝数各有不同，一种是低拷贝数的，每个细胞仅含有一个或几个质粒分子，称为"严紧型"复制的质粒，另一类高拷贝的质粒，拷贝数可达到20个以上，这种类型称为"松弛型"复制的质粒。质粒能编码一些遗......

1、装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不同;2、填料要加水搅拌成均匀悬液，悬液浓度依填料而不同，一般70-85%，迅速倒入空柱内，或吸或压，流速和具体步骤看说明书。3、这一点非常重要：装柱包括以后使用中绝对不允许柱内进入气泡(b......

异丙醇1.DNA不溶于异丙醇，加入异丙醇减少DNA溶解度，使得DNA析出。使得dna和少量蛋白质析出产生白色絮状沉淀。降低分子运动，易于形成沉淀。静置时间越长DNA得率越高。溶液一成分：SNETSDS十二烷基磺酸钠：可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离NACL调节盐离子浓度EDTA螯合金属离子，抑制DNA酶Tris盐......

实验方法原理硫氰酸胍能溶解细胞并使蛋白变性.当用于抽提缓冲液时，可产生无RNase的环境□组织抽提后，以中等转速离心匀浆液，以除去小溶性多搪。用苯酚：氯仿将上清液抽提出，RNA位于水相，DNA和蛋白质位于苯酚相和两相交界面。用乙酸钾将位于水相的多糖选择件的沉淀出来，然后用氯化锂选择性地将RNA从残......

概述AFLP（amplifiedfragmentlengthpolymorphism，扩增片段长度多态性）是由荷兰科学家PieterVos等于1995年发明的分子标记技术。文章发表于《NucleicAcidsResearch》Vol.23。AFLP是基于PCR技术扩增基因组DNA限制性片段，基因组DNA先用限制性内切酶切割，然后将双链接头连接到DNA片段的末端，接头序列和相......

RT-pcr实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2.RT按要求做，一般不会出太大问题。3.PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先......

pcr引物设计的11条黄金法则一、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。二、引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primerlength......