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分子生物学技术miRNA

腺病毒包装的原理和简要步骤
腺病毒包装


1 特点:


       1.1 几乎可以感染所有类型的细胞。


       1.2 可以获得复制缺陷型(E1和E3缺失)的腺病毒。


       1.3 病毒滴度高,产生病毒经过浓缩后可以达到1012 PFU/mL,能有效地进行增殖。


       1.4 腺病毒载体感染宿主的范围比较广。


       1.5 感染细胞时,不整合到染色体中,不存在激活致癌基因或插入突变等危险,生物安全性高。

 
2 原理:


       腺病毒(Adenovirus,Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒,其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型,大多数Ad载体都是基于血清型2和5,通过转基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制,因此是一种适用于治疗的高效控制系统。

 
3 腺病毒包装简要流程


       3.1 含有目的基因的腺病毒穿梭载体的构建和质粒纯化提取。


       注:客户也可以提供构建好的重组腺病毒穿梭载体。


       3.2 穿梭载体与腺病毒骨架质粒重组及鉴定。


       3.3 重组腺病毒质粒的酶切线性化。


       3.4 线性化的重组腺病毒质粒转染包装细胞,收获细胞以制备病毒粗提液。


       3.5 腺病毒扩增并纯化。


       3.6 分装,- 80 oC保存。


       3.7 滴度测定及无菌检测。

腺病毒扩增

       (本文转载丁香通)

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