慢病毒感染方法-上海中洪博元

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分子生物学技术miRNA

慢病毒感染方法

材料和试剂

1. 6 cm细胞培养皿(Fiosher).

2. 人类或小鼠细胞系，细胞试验所需要的生长培养基。

3. 凝聚胺(海美溴铵; Sigma H 9268)

4. 合适的选择性抗生素。

仪器

1. 细胞培养箱

步骤

慢病毒感染方法应该根据不同的细胞系和以细胞为基础的试验来进行优化。例如，下列的参数应该在大规模的感染之前进行优化，以确定一个实验的最适条件：

1) 细胞种植密度

2) 慢病毒的数量

3) 嘌呤霉素的浓度

4) 感染时间

2. 在6cm培养皿中种植适当密度的细胞，每孔体积6ml。

1) 贴壁细胞：转染前1天种植细胞

2) 悬浮细胞：转染当天种植细胞，培养基中需要含有凝聚胺。

3. 细胞中加入病毒:

1) (贴壁细胞):弃掉培养基，加入新鲜的含有凝聚胺的培养基。或者，弃掉部分培养基并且补充含有凝聚胺的培养基。调整体积和凝聚胺的浓度，使得凝聚胺的终浓度为8ug/ml。

4. 病毒感染:

1) 孵育细胞过夜。

2) 感染后24h更换培养基。弃掉培养基，换入6ml新鲜的培养基。如果需要抗生素选择，则使用含有抗生素的新鲜培养基。

注意：嘌呤霉素的浓度应该根据每种细胞系来进行优化；常用的浓度范围为： 2-5 μg/mL.

5. 孵育细胞，根据需要每隔几天更换培养基(如果需要，则要含有抗生素) 。孵育时间的长短主要依赖于感染后的试验。

（本文转载丁香通）

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