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细胞中mRNA原位杂交技术（三）

实验步骤：

mRNA原位杂交

二．杂交与显色
1、将加入探针的杂交液先于50℃预热，均匀涂于切片表面，加上硅化盖玻片，放于湿盒中，50℃孵育12-16h。
2、1×SSC（含50%甲酰胺），50℃洗涤2次，每次10min。
3、2×SSC（含50%甲酰胺），37℃洗涤10min。
4、2×SSC（0.5ug/ml RNaseA），37℃洗涤30min。
5、1×SSC，50℃洗涤10min。
6、1×PBS（含0.1%Tween20），50℃洗涤2次，每次10min。
7、PBT室温洗涤10min。
8、封闭液处理1-1.5h。
9、加抗体（用封闭剂按1:500比例稀释），均匀地涂于切片表面，放于湿盒中，室温1-2h后4℃过夜（抗体1:500稀释于1×封闭液）。
10、PBT洗涤3次，每次15min。
11、显色缓冲液洗5min。
12、滴加显色液，黑暗中显色至适度。可在显微镜下多次观察。
13、显色终止液洗10min，双蒸水洗5次。
14、甲基绿（0.25%）滴加染色几秒中，双真水洗5min。
15、脱水封片。

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