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【课题实验整体外包】-如何制备肺栓塞栓子栓塞法动物模型?

[模拟机制]在外周血管中形成血栓,栓子流经血液并到达肺动脉,阻塞肺动脉并形成栓子。

[建模方法]

1、用Nowak程序麻醉动物后,松开颈静脉的一侧和颈总动脉,动脉套管和静脉套管的一侧。动脉插管和静脉插管通过三通管连接,三通管的另一端通过1 ml注射器连接。连接时,注射器将抽吸0.6 ml凝血酶(10IH凝血酶U/ml)以及动脉插管和注射器。打开它们之间的通道,让血液流入1毫升注射器中,关闭通道,取出注射器并摇动几次以制成。充分混合凝血酶和血液,然后将凝血酶处理后的血液从三通管注入颈静脉。请注意,此时应将颈静脉夹紧10分钟。当形成凝块时,取下静脉夹以释放栓子。栓子跟随血液流向肺动脉,形成肺栓塞模型。

2、使用通常在碘标记法(rhodogen法)中使用的I标记的纤维蛋白原,将含125I的纤维蛋白原和凝血酶混合,形成125I标记的血凝块,然后将其注入动物体内。变质原法通常用于标记。具体步骤如下:取Lodogen溶液,将其溶于氯仿中,在室温下用氮气干燥以制成反应管,添加血纤蛋白溶液,立即添加Na125I11.1x10Bq,充分摇匀并在凝胶柱上混合标记的反应混合物。加。色谱脱碘,磷酸盐缓冲液洗脱。保存标记的纤维蛋白原峰洗脱液,并保存在-20°C下以备将来使用,并将比活控制在约2.78 x 10 Bq/mg,以确保纤维蛋白凝血酶活性。接下来,将125 I纤维蛋白原,CaCl2和人凝血酶依次添加到用柠檬酸钠抗凝的新鲜人全血中。快速吸出混合物,在聚乙烯试管中均匀混合,然后在37°C孵育20分钟,在试管中形成125I试纸条。将血栓转移到锥形瓶中,并用盐水摇动并冲洗它是。冲洗后,将125 I血栓切成等长的条,分别测量和记录放射性。

【型号特点】由于兔的体型中等,价格低廉,饲养方便,繁殖率和成活率高,且服从性情,所以兔纤维蛋白溶解系统比其他实验动物更人性化。它接近熔融系统。兔肺栓塞是最成熟,常见和理想的动物模型。狗肺栓塞模型能够在输注栓塞后4个小时内维持较高的平均肺动脉压和肺血管阻力。在该模型中溶栓后,平均肺动脉压和肺血管阻力将在30分钟后出现,并开始显着下降,这与肺栓塞患者的临床表现是一致的,是一个非常理想的模型..另外,狗血液丰富,可以耐受多种血液检查,避免了由于简单血液检查而引起的心血管变化。  [模型的评估和应用]由于该方法主要是在体外形成血块并将其注入体内的方法,因此与人相比,当形成肺栓塞时,凝血机制的失衡是它通常是高凝性的原因,并且该模型不能反映人体的高凝性。因此,仍然存在缺点。当使用狗来创建模型时,狗会变成大型个体,活泼的性格,对陌生的实验者的强烈攻击,一定的风险和相对昂贵的费用,这主要是由于研究更为复杂?

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