目的：探讨小鼠体外受精冻融后注射Cas9的可行性。

方法：用新鲜的C57BL/6J小鼠卵IVF后，原核胚胎（单细胞胚胎）和2细胞胚胎采用冷冻管法（EFS20/40）冷冻，第二天复活，稍后进行培养。比较冻融原核胚胎和 2 细胞胚胎的恢复率和存活率。将Cas9和稀释的细胞质同时注射到部分冻融原核和新鲜原核胚胎中，培养至2个细胞，比较注射后的存活率和2个细胞的发生率。

结果：B6小鼠原核胚胎冻融后回收率为92.5?成活率为92.8?2细胞胚胎回收率为90.5?成活率为95.8?两组数据差异显着（P\u003c0.05）。 Cas9注射后新鲜原核胚胎存活率为92.7?空白组存活率为97.5?Cas9注射后冻融前核胚胎存活率为82.6?空白组存活率为97.5? 92?冻融组与各组差异不同。显着（P0.05）。注射后2细胞胚胎发生率无显着差异（P\u003c0.05）。

结论：冻融的原核胚胎可用于Cas9显微注射。