一.   服务介绍                          

         噬菌体的分离

       噬菌体是病毒的一种，其特别之处是专以细菌为宿主，较为人知的噬菌体是以大肠杆菌为寄主的T2噬菌体。跟别的病毒一样，噬菌体只是一团由蛋白质外壳包裹的遗传物质，大部分噬菌体还长有“尾巴”，用来将遗传物质注入宿主体内。噬菌体是一种普遍存在的生物体，而且经常都伴随着细菌。通常在一些充满细菌群落的地方，如：泥土、动物的内脏里，都可以找到噬菌体的踪影。目前世上蕴含噬菌体最丰富的地方就是海水。

  二.菌株的分离实验过程与步骤             

       部分菌株对应的噬菌体分离过程步骤：

       (1) 以新鲜鸽粪4g 加入100ml 普通液体培养基内，放入37 ℃温箱培养24h。

       (2) 次日从中取出10ml70 ℃加热30min ,离心2000r/ 10min ,上清液用滤器过滤后保存于4 ℃冰箱备用。

       (3) 在普通琼脂平板底面分别注明1、2、3 号。

       (4)在1 号平板接种事先培养好的6h 幼龄菌乙型副伤寒杆菌一接种环；2 号平板接种幼龄菌福氏痢疾杆菌一接种环;3 号平板接种幼龄菌大肠杆菌一接种环,各平板的细菌密集涂布于琼脂平板表面。

       (5) 再用无菌接种环取鸽粪培养滤液一接种环,分别滴加于3 个已接种细菌的平板中央,放入37 ℃温箱孵育24h。

       先后从农贸市场采集各类海产品158 份, 分别用15 株假单胞菌作指示菌, 共分离到27 株噬菌体, 分离率为1711%。检出的噬菌体经实验室反复增殖、裂解等鉴定试验, 从中精选出9 株裂解力较强, 生物学性状较典型的噬菌体, 分别用双层琼脂法作单斑纯化培养。

       这9 株噬菌体的噬菌斑圆形透明, 边缘有的整齐有的稍不整齐, 直径均在110～210 mm; 在电镜下的形态可见有头部和尾部, 均呈蝌蚪状; 增殖液的效价均可达10829pfuˆm l。

       1996、1997 年两个夏季, 从大连市水产养殖公司所属皱纹盘鲍养殖区的不同地点采集海水和海底淤积物, 每次采集10 个样品, 每个样品为同一地点采集的3 份不同水样或海底淤积物混合而成。

       为了分离噬菌体, 取海底淤积物100g , 加入等量海水, 充分振荡30min , 静置, 过滤, 取上清液100mL 加入50mL 3 倍浓缩的海水胰蛋白胨及2mL 浓度为1012个/ mL 的河流弧菌2 菌悬液, 30 ℃培养过夜, 以促进噬菌体的增殖。海水样品过滤后按上述方法直接富集。

       经富集后的培养液加入1/ 10 的氯仿, 30 ℃静止1h , 于4000r/ min 离心20min , 取上清液用于双层琼脂法分离噬菌体。为了纯化噬菌体, 挑取单斑连续传代, 重复进行5 次以上, 选择平板上所有噬菌斑形态和大小基本一致的材料,进行下一步研究。 

       噬菌体的分离步骤的介绍

       (本文转载丁香通）