一.   服务介绍                           

       增殖细胞核抗原（ProliferatingCellNuclearAntigen简称PCNA）由Miyachi等于1978年在SLE（系统性红斑狼疮）患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名，以后的研究发现PCNA与细胞DNA合成关系密切，在细胞增殖的启动上起重要作用，是反映细胞增殖状态的良好指标，因此近年来掀起了对PCNA研究的热潮，尤其在肿瘤方面。

 二.实验方法                            
PCNA步骤跟一般的免疫组化步骤基本一样：
1、脱蜡、水化

        1)  60 ℃×20 min→Xylene 2 ×10 minutes；

        2)  100% absolute ethanol：2 ×5 minutes；

        3)  95% ethanol 2 minutes；

        4)  80% ethanol 2 minutes；

        5)  70% ethanol 2 minutes；

        6)  PBS洗3次×3 min

        7）封闭内源性过氧化物酶： 3%的过氧化氢，室温封闭10min

        9)  PBS溶液洗3次×3 min。
3、抗原修复暴露抗原决定族

       10)  切片放入0.01 M柠檬酸钠缓冲溶液（pH6.0）后，在微波炉里高火4 min至沸腾后，再加热约6 min×4次，每次间隔补足液体，防止干片。
4、封闭非特异性蛋白

        11)  PBS溶液洗3次×3 min；

        12)  将切片取出,周围水分用滤纸吸干,用组化笔在组织周围画上圈,在圆圈内组织滴入5%羊血清（与二抗来源一致）后放入湿盒中,室温30（10～30）min；
 
5、一抗孵育

        13)  甩去切片上的羊血清,用滤纸擦干组织周围残留血清，直接加入已稀释的一抗后，放入湿盒中室温1小时，然后4度过夜，从冰箱中取出需37 ℃复温45 min。
 6、二抗孵育

       14)  将一抗倒掉并用PBS洗5 min×5次；

       15)  用滤纸将圆圈周围的水吸去，加入已稀释的二抗后放入37 ℃恒温烤箱中30 min（回收）。

       16)  用PBS洗5次×5 min；
7、SP反应

       17)  加入SP后放入37度烤箱中30 min。

       18)  用PBS洗5次×5 min；
8、显色

       19)  加入DAB（快速滴入，观察染色情况，倒掉染液），显色时间控制在约5 min（3～10 min），由镜下观察颜色控制时间。
9、复染、脱水、透明、封片

        20)  用PBS 3次×3min后，用双蒸水洗5 min；

        21)  加一大滴苏木素染液，胞核蛋白染几秒，胞浆或胞膜蛋白染20 s后自来水冲洗，双蒸水洗5 min，再用PBS返蓝5 min。

        22)  脱水：

       70% ethanol 1-2 min

       95% ethanol 1-2 min；

       95% ethanol 1-2 min；

       100% absolute ethanol: (1-2) min；

       100% absolute ethanol: (1-2) min。

        23)  透明：Xylene 1×(1-2) min→Xylene 2×(1-2) min

        24)  封片：中性树胶。

      PCNA步骤

       (本文来源丁香园）