细胞平台
一. 服务介绍
滴度:
在半定量或定量测定中,将标本作一系列稀释后进行试验,呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低,可以判断标本反应性的强弱。 滴度(抗体的多少)越高,受传染的机会就越小。
实验目的 了解病毒感染力测定的几种常用方法,掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。 二、测定病毒感染力的方法 半数致死量LD50( 50% lethal dose):用动物或鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose):用鸡胚来检测 半数细胞培养物感染量TCID50(50% tissue culture infective dose):用细胞来检测蚀斑形成单位(plaque forming unit,PFU):用细胞来检测
二.实验使用材料
材料
1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液(PRV)
三.实验操作步骤
1、在离心管中用MEM将病毒液作连续10倍的稀释,从10-1-10-6。
2、将稀释好的病毒接种到96孔培养板中,每一稀释度接种一纵排,共8 孔,每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl,使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照,正常细胞对照作两纵排。(100µl生长液+100µl细胞悬液)
5、逐日观察并记录结果,一般需要观察5-7天。
6、结果的计算,按Reed-Muench两氏法或Karber法。
距离比例=(高于50%病变率的百分数-50%)/(高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数) =(91.6-50)/(91.6-40) = 0.8 lgTCID50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数 =0.8×(-1)+(-3) =-3.8 TCID50=10-3.8/0.1ml
(本文来源百度文库)
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