一.   服务介绍                            

       目前，感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备，即用低渗CaCl2溶液在低温（0℃）时处理快速生长的细菌，从而获得感受态细菌。此时细菌膨胀成球形，外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表面，通过热激作用促进细胞对DNA的吸收。转化效率可达106-107转化子/微克DNA。

二.实验材料以及试剂                     

       大肠杆菌（E. coli）菌株（以克隆菌：DH5α为例）；

       LB固体和液体培养基

       TFBI（预冷）

三.实验方法以及步骤                     

       取实验室-80度保存的DH5α菌种在无抗性的LB平板上划线，37度培养过夜，进行活化。（这里挑选低代数的菌种很关键，如果有条件尽可能在购买新的菌种或从其他地方拿到新的菌种时即保存多管，放在超低温冰箱可以保存很久，我们实验室使用的都是5-6年前的菌种了！千万不要每次活化后保存活化后的菌种，更不要将菌种长期保存在-20度）；

       从LB平板上挑取单菌落，尽量选择菌落较饱满，边缘平滑，个头较大、长势较好的菌落；

       挑选3-4个上述单菌落分别接种于装有3～5mL 无抗性LB液体培养基的试管中；

       37℃下振荡培养过夜（12h左右），进行充分活化，这里摇床最好设定较高的转速（一般不低于200rpm），对细菌的活化更有利；

       从平行的试管中挑选状态最佳的克隆（大部分应该没有大的差别，随便选一个都可以，接种多管的主要目的是排除某些明显状态较差的克隆）；

       将上述选定克隆的菌液以1:100的比例接种到大的锥形瓶中，37℃振荡培养2～3h至OD590达0.4-0.6；

       将培养好的菌液转入洁净无菌的50mL离心管中，冰上放置10min（此时，可以将配置好的TBFI溶液冰浴预冷了，离心机也要开始预冷了，如果你们的离心机降温较慢，最好再提前一点）；

       在4℃下，4000rpm离心10min，弃去上清；

       加入初始细菌培养基1/2.5的冰上预冷的TBFI溶液（如果前面使用的是60ml，这里则为60/2.5=24ml），轻轻悬浮细胞，冰上放置10min；

       4℃ 4000rpm离心10min，弃去上清；

       加入初始细菌培养基1/25体积的预冷TBFII（如果前面使用的是60ml，这里则为60/25=2.4ml，也即为TBFI的1/10，当然具体体积也可以根据个人经验上下变动），轻轻悬浮菌沉；

       分装至EP管中，每管分装100ul（EP管最好预冷，分装过程要求在冰上进行）；

       -80度长期保存（至少可以保存一年）；

       感受态细胞的制备方法

       (本文来源新浪博客）