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一. 服务介绍
原理:
二.实验方法以及步骤
步骤:
1、大蒜幼根的培养:提前3~5天进行培养,将大蒜瓣剥去外边膜质枯皮,下端可见许多微微凸起的根原体,将蒜瓣架在烧杯(大小与蒜瓣适宜)口上,杯中盛满清水,使蒜瓣的下部浸入水中,置温暖处,注意每天换水,经3~5天后,即可长出1-2cm的嫩根。
2、处理根尖:阳性检测采用M CrO3,M NaN3,M EMS,对照用自来水处理,处理时间24h。
3、恢复培养:处理后的根尖用自来水浸洗3次,每次2-3min,洗净后在水中恢复培养24h。
4、固定:用甲醛:冰醋酸(3:1)固定液固定24h后弃去固定液,或换入70%酒精中保存。
5、酸解:弃去固定液,用清水漂洗2-3次,吸净水,加入6M盐酸,于室温解离10min,弃去盐酸,漂洗根尖2-3次,彻底洗净盐酸。
理论补充:
1、 微核是无着丝点的染色体断片,在有丝分裂后期不能向两极移动,所以游离于细胞质中,在间期细胞核形成时,即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构,直径大约是细胞直径的1/20-1/5,这就是微核(micronucleus)。微核是常用的遗传毒理学指标之一,指示染色体或纺锤体的损伤。
2、 染色体断裂实际上就是染色体的缺失。如果进行染色体畸变分析,首先要做染色核型分析(包括正常和异常的)。染色体数目多,形状小,则适于做核型分析的中间分裂相不易得到,而且核型分析时需要较好的遗传学知识,还需要较丰富的经验。与之比较,微核法是一种不需特殊 试剂 及设备,快速而简便的检测方法。
3、 固定是借助于物理方法或化学药剂的作用,迅速透入组织和细胞将之杀死,并且使其结构和内含物如:蛋白质,脂肪,糖类以及核物质与细胞器等,在形态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态,同时更易于染色,可以较清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。
4、 分离的作用是去除未固定的蛋白质, 同时使胞间层的果胶类物质解体,细胞分散而易于观察。
(本文转载丁香园)
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