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生物学研究

细菌抗酸染色法

1、原理与应用

生物实验外包


       结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色,若加温或延长染色时间使其着色后,再用3%盐酸酒精处理也不易脱色,经此染色后,结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色,而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。


2、材料


       (1)结核病人痰


       (2)抗酸染色液


       (3)玻片、片夹、滤纸片、竹签、空平皿、污物盆。


3、方法


       (1)取洁净的竹签沾取痰中血丝或脓性痰,在清洁无油脂玻片上涂开。涂抹区约拇指盖大。用过的竹签放到空平皿内待高压灭菌。


       (2)涂片自然干燥后,用片夹挟住玻片一端,通过火焰固定。


       (3)涂抹面用滤纸片盖上,然后往滤纸片上滴加石炭酸复红染液,使滤纸片完全被染液浸湿,持玻片在小火上加温片刻然后离开火焰,此时可见到玻片上冒出蒸气。待蒸气消失后再加温,如此反复3~4次,约5min,加温时随时添加染液勿使纸片干涸。


       (4)玻片冷却后,用接种环挑去滤纸扔到污物盆内,流水冲洗玻片。


       (5)滴加3%盐酸酒精脱色,至涂抹均匀部位基本没有红色再脱下为止,水洗。


       (6)滴加吕氏美蓝染液30sec,水洗。


       (7)吸干、镜检。


4、溶液配制


       萋-尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液


       (1)石炭酸复红液:硷性复红4g,溶于95%酒精100ml,作成饱和溶液,再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成。


       (2)3%盐酸酒精液。


       浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成。


       (3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液


       美蓝2g,溶于95%酒精100ml中,作成饱和液。再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合均匀即可。


       (本文转载丁香园)


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