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目的:通过探索适宜的培养条件,建立小鼠睾丸器官培养模型。
方法:利用旋转通气培养法在体外培养睾丸,优化培养条件,并与Transwell小室培养法进行形态学比较。HE染色观察睾丸组织结构的变化,BrdU染色法观察睾丸在体外的细胞增殖,放射免疫法观察体外培养睾丸的睾酮分泌能力,免疫组化法观察睾丸中功能蛋白的表达。
结果:通过培养结局的对比,旋转通气培养法培养的睾丸组织形态更完整。睾丸大小以0.3~0.8 mm3为宜。各组精原细胞增殖指数呈上升趋势,Sertoli细胞增殖指数呈下降趋势:3 d组精原细胞增殖指数的增加与1 d组相比有统计学差异(P<0.05),5 d组Sertoli细胞增殖指数的减小与1 d组相比有统计学差异(P<0.05)。睾酮分泌量随培养天数的增加而减少且差异均有统计学意义(P<0.05)。培养3 d后,Leydig细胞胞浆内可见3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、细胞色素P450 17α羟化酶(P450c17)、胆固醇侧链裂解酶(P450Scc)蛋白的表达,Sertoli细胞胞浆内可见波形蛋白(Vimentin)表达。
结论:利用旋转通气培养法成功建立睾丸器官体外培养的模型。
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