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冰冻切片免疫荧光法

  一.   服务介绍                          


       免疫荧光技术是将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进行细胞定位。


  二.实验方法以及步骤                    


       (1)切片冷风吹15 min;


     (2)PBS洗2 min×3;


     (3)滴 加一抗37 ℃ 1 h,PBS洗2 min×3;


     (4)滴加低倍景稀释液,稀释的2抗(FITC)37 ℃ 1 h,PBS洗2 min×3;


     (5)荧光 封片剂封片。
免疫组化抗原暴露法
 
      蛋白酶K消化法:0.25 mg/ml蛋白酶K滴染37 ℃20 min,PBS 2 min × 3;


      胰酶消化法:0.2% 胰酶滴染37 ℃ 20 min,PBS 2 min×3;


      胃酶消化法:0.4%胃蛋白酶(p H 2)滴染37 ℃ 20 min,PBS 2 min×3次;


      微波加热枸橼酸抗原修复法:用耐高温的塑料染缸装200 ml枸橼 酸抗原修复液,加盖微波大火(750 W)加热2 min沸腾,立刻转为小火(90 W)10 min,自然冷却至室温,蒸馏水冲洗2次,入PBS泡2 min;


      EDTA抗原修复法:用耐高温的塑料染缸装200 ml EDTA抗原修复液,加盖微波大火(750 W)加热2 min沸腾,立刻转为小火(90 W)10 min,自然冷却至室温,蒸馏水冲洗2次,入PBS泡2 min


       (2)PBS洗2 min×3;


       (3)滴 加一抗37 ℃ 1 h,PBS洗2 min×3;


       (4)滴加低倍景稀释液,稀释的2抗(FITC)37 ℃ 1 h,PBS洗2 min×3;


       (5)荧光 封片剂封片。

       冰冻切片免疫荧光法

       (本文来源丁香园)

冰冻切片免疫荧光法

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