一.   服务介绍                          

       免疫组化，是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

二.实验方法和步骤                        

       免疫组化

       1.烤片

       2.切片常规脱蜡至水

二甲苯10min→二甲苯10min→二甲苯10min→无水乙醇5min→95%乙醇5min →90%乙醇5min→75%乙醇5min→50%乙醇5min→纯水

       3. 抗原修复

       4. 去除过氧化物酶活性：3%H2O2覆盖，室温静置8-10min→PBS缓冲液清洗 5min x3次

       5. 封闭：5%BSA封闭液孵育30min/37℃（不冲洗）

       6. 加一抗：按照说明书推荐浓度和孵育条件，孵育过夜

       7. 复温，PBS缓冲液冲洗 5min x3次

       8. 加二抗：孵育30min/37℃ →PBS缓冲液冲洗 5min x3次

       9. 显色：DAB显色→显色后用PBS缓冲液冲洗 5min x3次

       10. 复染：苏木素染2-3min

       11. 分化：1%酒精盐酸分化

       12. 返蓝

       13. 脱水透明：纯水→50%乙醇5min→75%乙醇5min→90%乙醇5min→95%乙醇5min →无水乙醇5min→二甲苯10min→二甲苯10min→二甲苯10min

       14. 吹干封片

       免疫组织技术介绍