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一. 服务介绍
免疫组化,是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
二.实验方法和步骤
免疫组化
1.烤片
2.切片常规脱蜡至水
二甲苯10min→二甲苯10min→二甲苯10min→无水乙醇5min→95%乙醇5min →90%乙醇5min→75%乙醇5min→50%乙醇5min→纯水
3. 抗原修复
4. 去除过氧化物酶活性:3%H2O2覆盖,室温静置8-10min→PBS缓冲液清洗 5min x3次
5. 封闭:5%BSA封闭液孵育30min/37℃(不冲洗)
6. 加一抗:按照说明书推荐浓度和孵育条件,孵育过夜
7. 复温,PBS缓冲液冲洗 5min x3次
8. 加二抗:孵育30min/37℃ →PBS缓冲液冲洗 5min x3次
9. 显色:DAB显色→显色后用PBS缓冲液冲洗 5min x3次
10. 复染:苏木素染2-3min
11. 分化:1%酒精盐酸分化
12. 返蓝
13. 脱水透明:纯水→50%乙醇5min→75%乙醇5min→90%乙醇5min→95%乙醇5min →无水乙醇5min→二甲苯10min→二甲苯10min→二甲苯10min
14. 吹干封片
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