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免疫组化

  一.   服务介绍                          


       免疫组化,是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)



二.实验方法和步骤                        


       免疫组化

       1.烤片

       2.切片常规脱蜡至水

二甲苯10min二甲苯10min二甲苯10min→无水乙醇5min95%乙醇5min 90%乙醇5min75%乙醇5min50%乙醇5min→纯水

       3. 抗原修复

       4. 去除过氧化物酶活性:3%H2O2覆盖,室温静置8-10minPBS缓冲液清洗 5min x3

       5. 封闭:5%BSA封闭液孵育30min/37℃(不冲洗)

       6. 加一抗:按照说明书推荐浓度和孵育条件,孵育过夜

       7. 复温,PBS缓冲液冲洗 5min x3

       8. 加二抗:孵育30min/37℃ →PBS缓冲液冲洗 5min x3

       9. 显色:DAB显色→显色后用PBS缓冲液冲洗 5min x3

       10. 复染:苏木素染2-3min

       11. 分化:1%酒精盐酸分化

       12. 返蓝

       13. 脱水透明:纯水50%乙醇5min75%乙醇5min90%乙醇5min95%乙醇5min →无水乙醇5min二甲苯10min二甲苯10min二甲苯10min

       14. 吹干封片



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       免疫组织技术介绍


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