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晚期糖基化终产物受体在脂多糖介导小鼠肺微血管内皮细胞骨架变化中的作用

目的:建立分离高纯度肺微血管内皮细胞的方法,观察脂多糖(LPS)刺激下野生型小鼠和晚期糖基化终产物(RAGE)基因敲除小鼠的受体细胞,骨骼肌肌动蛋白的变化。

方法:微血管去除6-8周龄的野生型C57小鼠和RAGE基因敲除小鼠的肺,用I型胶原酶消化,用尼龙细胞过滤,并通过免疫磁珠法分离出原代小鼠肺。通过形态学和免疫荧光鉴定内皮细胞(PMVEC)后,用LPS(1 mg/L)刺激它们多次,并通过激光共聚焦显微镜观察细胞骨架F-肌动蛋白的变化。

结果:在显微镜下,可以看到原代培养的PMVEC为纺锤形或多边形,并通过细胞抗因子相关抗原(VIII-Ag)染色得到了高度纯化。 LPS刺激后,野生型小鼠的PMVEC骨架重排并形成应激纤维,RAGE基因敲除小鼠的PMVEC骨架完好无损。

结论:可以通过免疫磁珠法获得高纯度的小鼠肺微血管内皮细胞,RAGE参与LPS介导的小鼠肺微血管内皮细胞骨架的破坏。

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