动物实验技术
灌注固定主要用于神经系统,其他组织意义不是很大,而且耗时耗力。对神经系统防止变性效果较好!
2. 关于穿刺:灌注大鼠时要把穿刺针的尖端插入到升主动脉内,但不宜进入升主动脉过长,在动脉内见到针头或插入约1mm左右即可;灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可,不必要插入到升主动脉内。
操作的要点是:第一,操作要迅速,剪开膈肌后,迅速沿腋前线剪开胸壁,并把胸前壁往上翻,暴露心脏;第二,一定要在明视野下操作,要剪开心包壁层的前壁,暴露升主动脉和肺动脉干的根部,确保穿剌针能进入升主动脉;
第三,穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏,但不要夹得过紧,要让心腔内留有一定的间隙,然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针;第四,穿刺方向要正确,从心尖部开始,从左下方斜向右上方,若遇阻力要改变方向再试,不要用力蛮插。
将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净,用眼科镊子轻轻夹住心 外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将心脏向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。
插入时动作要慢,针尖方向不要偏向右侧,以 免刺入右心房,如果感到有阻力,则将针退后、调整方向重新进针,直到进入主动脉,灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置,灌注针进入主动脉的长度最 好为3~5毫米,然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内,这样由于主动脉瓣的关闭,灌注液很难进入主动脉,而是沿着心室的切口流出,致使灌注失败。
另 外,灌注针插入成功后,一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室,这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好,不能偏右使灌注针插入右心室。
7. 整个过程均应将动物放在冰上,以便于最大程度的保存目的蛋白和酶的活性
(本文转载丁香通)
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