一、免疫组化操作流程（PAP法、ABC法）

       1. 脱蜡至水：二甲苯（1）、（2）脱蜡各15min→无水乙醇（1）、（2）各5min→90%乙醇5min→水洗→PBS5min

       2. 抗原修复：

       1）微波修复：微波中高档5min 3次→自然冷却至室温→PBS过一遍3次min，

       2）酶消化：0.1%胰蛋白酶37℃孵育30min→ PBS5min 

       3. 阻断内源性过氧化物酶：置3% 3次双氧水浸泡15min →PBS5min 

       4. 封闭：10%正常二抗血清室温10min 

       5. 一抗孵育：甩去血清后加一抗，置湿盒内4℃过夜→PBS5min 3次3次

       6. 二抗孵育：擦片后加二抗，置湿盒内37℃孵育30min→PBS5min

       1. 4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后； 

       2. 加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%过氧化氢）30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01MPBS清洗5min×3； 

       3. 加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100＋0.01MKPBS 100ml）30min，以增加细胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3； 

       4. 加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋叠氮纳0.08g）稀释的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗体，0.01MKPBS洗5min×3； 

       5. 加入0.01MKPBS稀释的的二抗，室温孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3； 

       6. 加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次； 

       7. 加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般不超过30min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01MKPBS终止反应； 

       8. 梯度酒精脱水之后，封片，拍照。

       （本文转载丁香通）