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细胞实验技术

肿瘤组织源性的原代细胞培养

       肿瘤细胞的原代培养与正常细胞的原代培养的条件基本相似。一般常用原代细胞的基础培养基,10%血清浓度即可,在原代培养时需加入原代细胞培养的特制添加物,或原患者血清(1%-2%)以利细胞生长。用细胞生长因子如胰岛素、氢化可的松、雌激素等等。也可以考虑动物媒介培养。,根据细胞种类不同选用不同的促细胞生长因子。肿瘤组织分离为肿瘤细胞原代培养的方法主要有组织块法、酶消化法、钽网法、脱落细胞法等。


1.组织块法


       将取得的瘤组织去除脂肪、结缔组织及坏死部分,在平皿中用Hanks液洗3次,剪碎组织,切成1-2mm3 小块,接种于培养瓶(或皿)中,37℃、5%CO2 或加盖并塞在普通恒温箱中培养。


2.酶消化法


       在剪碎组织,切成1-2mm3 小块中,加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml胶原酶,在37℃水浴中消化30min或更长一些,去除消化液,用洗液洗3次,培养基洗1次后,用完全培养基悬浮,并用吸管吹打分散制成细胞悬液,计数。以(5-10)x108 个/L细胞浓度,在含有10%小牛血清的RPMI、EagleMEM或DMEM中,在37℃、5%CO2 下分瓶(或皿)中培养。


3.钽网法


      在一张面积约为1cm2 的钽网上放入上述剪碎的一块或几块肿瘤组织块(1-2mm3 大小),用镊子轻压,使其粘于网上,再把钽网放入培养皿中,使网下的组织块与皿壁紧紧接触,于37℃、5%CO2 下培养,每隔2-3天换液一次,5天后可见有上皮细胞从网上移出,并能在相当于肿瘤组织部位形成纯净的单层上皮细胞。


4.脱落细胞法


       将新鲜的肿瘤组织去除脂肪和结缔组织,洗液洗2次后,用刀片将肿瘤组织切成细薄片,在切割的同时有许多上皮细胞脱落下来,脱落细胞经洗涤后,加入完全培养基,便可获得较纯的上层细胞,于培养瓶(或皿)中,37℃、5%CO2 下培养,每隔2-3天换液一次,7-10天上皮细胞逐渐长成单层。


       (本文转载丁香园)



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