实验方法原理 

       将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 

实验材料 

       小鼠 

       试剂、试剂盒 

       DMEM无血清DMEM培养基胰酶PBS

       仪器、耗材 饭盒纱布剪子镊子烧杯平皿研磨玻片滤网离心管6孔培养板吸管移液管手套微量加样器 

实验步骤 

一、实验材料准备 

       1.  动物：小鼠。 

       2.  试剂：DMEM(含血清)、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS。 

       3.   器械：饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管(15/50 ml)、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器。

二、方法 

       1.   将小鼠断颈致死，置75%酒精泡2-3秒钟，取肝脏，置于盛有PBS的平皿中。 

       2.   剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物，转移到另一个盛有PBS液的平皿中。 

       3.  用手术剪将脏器剪成小块(大小约1mm2)，玻片研磨，转到离心管，离心(1 000 rpm，5 min)。 

       4.  视组织或细胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶，37℃中消化20分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。 

       5.   加入3-5 ml含血清的培养液以中止胰酶消化作用。 

       6.   用100目孔径滤网滤过，除去未消化的大组织块。 

       7.   再次离心5 min，弃上清液。 

       8.   加入无血清培养液5 ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。 

       9.  加入含血清的培养液1-2 ml(视细胞量)，血球计数板计数。 

       小鼠肝细胞原代培养实验

       （本文来源丁香通）