蛋白质盐析分离法-上海中洪博元

EXPERIMENTAL
METHOD实验方法

分子生物学技术miRNA

蛋白质盐析分离法

一、蛋白质盐析分离的原理：

蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增大而上升(盐溶)，当盐浓度增大到一定数值时，其溶解度又逐渐下降直至蛋白质析出。

盐析的发生是由于盐浓度增大到一定数值时使水活性降低，导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，引起蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出，最后经离心机分离后获得沉淀物和上清液。

二、影响蛋白质盐析分离的因素：

1、蛋白质浓度：

蛋白质浓度过大，盐析时发生共沉现象，分离效果不好。蛋白质浓度太稀，耗盐量过大，蛋白质回收率低。一般蛋白质浓度在2.5%～3.0%较适中。

2、离子强度：

离子强度越大，蛋白质的溶解度越低，越容易产生盐析现象。

3、离子类型：

离子半径小而价数高的离子，对盐析影响较强。离子半径大而价数低的离子，对盐析影响较弱。

4、PH值：

蛋白质所带净电荷越多，溶解度越大。净电荷为零时，溶解度最低。一般将PH值调到蛋白质等电点附近，这样有利于盐析。

5、温度：

低离子强度或水中，在一定范围内蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大。高盐溶液中，蛋白质的溶解度随着温度的升高有时反而下降。一般情况下在0～4℃操作。

（本文转载丁香通）