我们都知道基因剪刀 CRISPR/CAS9 技术今年大火，之所以这个技术这么火和其对基因操作的方便性，高效性，准确性及高性价比是分不开的。CRISPR/Cas9 是一种能够对任何物种基因组的特定位点进行精确编辑的技术。

       其原理是核酸内切酶 Cas9 蛋白通过导向性 RNA (guide RNA， gRNA) 识别特定基因组位点并对双链 DNA 进行切割。一旦 DNA 链被切开后就能对特定基因引入敲除、敲入、突变等编辑。

图注：基于非同源末端修复和同源重组原理可进行基因敲除，敲入和突变等操作

       然而基于传统的 sgRNA 载体的 CRISPR-CAS9 技术，由于仅靶向一个位点，所以更适合单个编码基因的敲除，对于多个编码基因和非编码基因则需要同时导入多个 sgRNA 载体/病毒，使操作难度上升不小.

图注：单 sgRNA 系统针对一个位点进行编辑

       针对多个编码基因其敲除策略可以为：

图注：同时设计两个或多个编码基因的特异性 sgRNA 序列，插入载体中可在一次操作后敲除多个编码基因

      而针对非编码基因或区域其策略可以是：

图注：针对想要敲除的非编码基因或区域两头设计特异性 sgRNA 序列，靶向切除整段非编码区域，以达到非编码基因敲除的目的

       对于通路研究的同学来说，有时需要同时抑制多个通路，而通路抑制剂还是蛮贵的，如果有了可靠的通路关键基因的 sgRNA 序列，那就可以像通路抑制剂一样使用 CRISPR/CAS9 技术来同时抑制多个信号通路了，大大提高了性价比。

       对于 Car-T 研究来说，编辑 T 细胞制作 UCAR-T 的时候需要同时敲除多个检查点基因使得 CAR-T 细胞标准化和可量产化，这时同时导入多个 sgRNA 就可以方便的满足这一要求。