分子生物学技术miRNA
通过包含的带Myc标签的RXR表达载体,美国Signosis公司的RXR 免疫共沉淀试剂盒用于分析RXR和RXR相关蛋白的相互作用。
A. 优点:
蛋白相互作用的功能性检测方法——可用于RXR与其它蛋白的相互作用
噪音低——WB检测时非特异信号非常低
快速——蛋白用抗Myc磁珠沉淀,无需预分离步骤,缩短孵育时间
简便——试剂盒包含全部试剂组份
B. 原理:
Myc标签的RXR表达载体用于转染靶细胞。转染后,RXR表达Myc抗原决定部位标签,与反应蛋白结合。RXR复合物与相应蛋白可以快速高效的与抗Myc抗体免疫共沉淀
共沉淀复合物通过磁力架进一步与未结合的蛋白分开,洗涤后,复合物高效彻底的从磁珠上洗脱下来,用SDS-PAGE分离以进一步WB分析。磁珠上固相的Myc抗体在低PH洗脱条件下通过阻止轻链和重链的解离提供更好的WB检测。
(本文转载丁香通)
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