我们体内细菌的数量是细胞总数的十倍还多，据估计所有细菌的DNA加起来包含330万个不同的基因，这一数目是人类基因总数的大约160倍。我们小肠中大约寄居了1千克的细菌来帮助我们进行食物消化和代谢，产生维生素以及保护机体避免感染发生。

       上面是一些教科书上的知识，最近大量研究又揭示了人体内这些“小伙伴”令人意想不到的新功能。有证据表明肠道细菌能够保护我们不受或者让我们更容易受到病原体的影响，这些病原体可能参与炎症，糖尿病以及肥胖等疾病的发生。大量数据还表明，肠道细菌甚至可以影响我们的情绪和行为。

       微生物研究目前是一个非常火热的研究领域。五月份美国政府启动了一项国家微生物组计划，总预算大约5亿美元，而欧盟也资助了超过300个与微生物组有关的研究项目。

       来自西班牙国家研究委员会农业化学和食品技术研究所的Yolanda Sanz在欧盟微生物研究领域最大的共同体MyNewGut中负责协调工作，该共同体由15个国家的30个合作伙伴组成。外国网络媒体youris.com采访了Sanz，询问了一些关于研究前景以及微生物组与大脑联系的一些有趣问题。

DNA提取-外周血DNA提取

分离外周血白细胞提取方法：

试验步骤：

       1、 取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10 min。

       2、 小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。

       3、 在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15 min。

       4、 2500rpm离心10 min，弃上清。

       5、 加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15 min。

       6、 3000rpm离心10 min，弃上清。6 P) 

       7、 倒置离心管，去掉残液。

试验要求：

氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA：

试验试剂：

       Ligsis buffer： 133mM NH4Cl NHCl 7.12g   0.9mM NH4HCO3 NH4HCO3 0.071g   0.1mM EDTA 0.5mM   EDTA 0.2ml；最后加灭菌去离子水至1000ml，高压灭菌。

       ACD抗凝剂： 柠檬酸 1.68g   柠檬酸钠 4.62g   葡萄糖 5.15g； 最后加灭菌去离子水至350ml，高压灭菌。

       提取缓冲液（Extraction buffer）： 10mM TrisCl (PH=8.0) 1M Tris.Cl(PH=8.0) 1ml   0.1mM EDTA (PH=8.0) 0.5mM EDTA(PH=8.0) 20ml   0.5% SDS 10% SDS 0.5ml；最后加灭菌去离子水至100ml，高压灭菌。

试验步骤：

       1、 在500μl抗凝血中加入ligsis buffer1000μl，充分颠混至清亮。以4000rpm，离心5min。弃上清液。

       2、 沉淀中加入ligsis buffer1500μl，充分匀浆。以6000rpm，离心5min。

       3、 彻底弃去上清，加入extraction buffer 500μl（裂解细胞），混匀置于37℃，水溶1h。

       4、 加入8μl的蛋白酶 K，颠混，37℃过夜（或55℃，3h，但是37℃效果要好些）。

       5、 每管加入450μl饱和酚（取溶液下层）缓慢摇晃10min，以5500rpm，离心15min。

       6、 取上清，每管加入250μl饱和酚和250μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。

       7、 取上清，每管加入500μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。

       8、 取上清，每管加50μl的3M的NaAC＋，适量无水乙醇（预冷）至满，摇匀放入-20℃保存2h以上。

       9、 以12000rpm，离心20min。去上清，加入70％乙醇500μl，以12000rpm，离心5min，去上清，50－60℃干燥。

       10、 加入50μl灭菌去离子水，转弹，混匀。

NaI提取法提取外周血白细胞基因组：

实验步骤：

       1、 取外周抗凝血（全血）100ul于eppendorf管中，12000rpm离心12min 。

       2、 弃上清，加双蒸水200ul溶解，摇匀20s。

       3、 混匀后加6M NaI溶液200ul，摇匀20s 。

       4、 加入氯仿/异戊醇（24：1）400ul，边加边摇，摇匀20s，12000rpm离心12min。

       5、 取上层液350ul，加入另一新eppendorf管中，加0.6倍体积异丙醇，摇匀20s，室温放置15min，静置后的反应体系15000rpm离心12min，使沉淀紧贴eppendorf管壁。

       6、 弃异丙醇，加70％乙醇1ml（不振动），以15000rpm离心12min。

       7、 弃乙醇，敞开eppendorf管盖， 烘干（37℃恒温箱）后，加1xTE溶液30ul，溶解DNA＞12h以上，制成的      DNA液-20℃冰箱保存备用。 

常用的外周血白细胞基因提取方法：

试验原理：

       苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA 的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来。DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。

       蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。

       酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在1/10 3mol/LNaCl存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。

试验步骤：

       1、 将1ml EDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀，3500rpm离心15min,倾去含裂解红细胞的上清。重复一次。用0.7ml DNA提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。

       2、 将上述DNA提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml蛋白酶K 0.2ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀，液体变粘稠。50℃水浴保温3h，裂解细胞，消化蛋白。保温过程中，应不时上下转动几次，混匀反应液。

       3、 反应液冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管5-10min，直至水相与酚相混匀成乳状液。5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿﹕异戊醇（24﹕1），上下转动混匀，5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复一次。

       4、 加入1/5体积的3mol/L NaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇，室温下慢慢摇动离心管，即有乳白色云絮状DNA出现。用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA，转入另一1.5 ml离心管中，加70%乙醇0.2ml，以5000rpm离心5min。

       洗涤DNA，弃上清，去除残留的盐。重复一次。室温挥发残留的乙醇，但不要让DNA完全干燥。加TE液20ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动，DNA完全溶解通常需12-24h。制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。

DNA提取

        (本文转载丁香园）