分子生物学技术miRNA
虽然 TriumX-100 是从鼠肝质膜溶解胰岛素受体的一种良好的去垢剂,但它未必适合其他膜蛋白的溶解。这里,介绍一种筛选去垢剂的策略以确定它是否适于溶解某一待分离的膜蛋白。
	
 
实验步骤
蛋白检测操作程序
	
 
1) 将膜制备物悬浮于所选的缓冲系统(如,磷酸缓冲液或 HEPES 缓冲液)中。缓冲液浓度应为 50 mmol/L,pH 应接近该缓冲液的 pKa。蛋白终浓度应为约 10 mg/ml。将此膜悬液保存于 4°C。
2) 将被试的各去垢剂配制成 10%(100 mg/ml) 的储液,再用缓冲液将各去垢剂储液稀释成 0.2%、1%、2% 和 6%。
	
 
4) 混合物于 4°C 下搅拌混合 1 h。
	
 
7) 分别测定各上清及沉淀中的蛋白质活性。
	
 
注:比较各上清及沉淀中的蛋白质活性,观察随着去垢剂浓度的增加,该去垢剂是否能将蛋白质从膜上溶下来。应将蛋白质活性对去垢剂-蛋白质比作图。
(本文转载丁香通)
	
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