全国服务热线400-689-6719

最新研究成果

行业动态

联系我们

分子生物学技术miRNA

教你怎么看PCR 结果图

         RT-PCR检测 

       辛辛苦苦提完 RNA,逆转录后一个个孔加完引物和模板,最后进行 RT-PCR,你以为这样就可以美滋滋地坐等结果了?等到一幅下面这样的结果图,不知道对于刚接触 RT-PCR 的你来说内心是否是崩溃的?




这是啥?怎么看?

       别急,让我慢慢跟你介绍,看完后你就能准确的分析出你的 RT-PCR 结果了。(这里以 7500 软件为例进行介绍)


       1. 首先设置好内参和对照组(在 Analysis Settings 处),一般我们在上机前会对应设置好的,如果设置好的话可以直接跳至第 3 点。如果没有设置好的话是需要重新进行设置。



       2. 点击进去后,选择对应好的内参和对照组。(在 Relative Quantization Settings 选项下)



       3.选择好内参和对照组后,我们首先看看 PCR 跑的有没有问题,在这里大家最常会见到的问题是在样品池出现了三角形符号,如下图:



       那么这些三角形代表什么意思?没错,聪明的你应该已经想到是这个孔出现了问题,而三角形中的数字是几则代表了孔中有几个问题。具体又是什么问题呢?我们就要通过 analysis 中的 QC Summery 进行查找。



       举个栗子,比如图中的 A9 孔,出现了 2,则表示有 2 个问题,第 1 个问题如上图所示,High standard deviation 高的标准偏差,表示可能是你上样时导致的样品复孔之间差异较大。第二个问题则是下图中,系统认定 A9 孔中的数值偏差较大,属于异常值。



       当然,还有比较常见的问题是引物二聚体引起的双重峰,如 A4 孔。



       4. 溶解曲线(melt curve):表示随温度升高 DNA 的双螺旋结构降解程度的曲线。总的 DNA 双螺旋结构降解一半的温度称为熔解温度(Tm),不同序列的 DNA,Tm 值不同。DNA 中 G-C 含量越高,Tm 值越高,成正比关系。正如上面提到的,正常的样品孔溶解曲线应该是单峰的,如下图。如果出现了双峰,则要考虑是否引物设计不合理或者引物过量引起溶解曲线出现多峰的情况。



       5. 如果前面的几项都没有太大的问题的话。最后我们看看最重要的结果,也就是目的基因的变化情况了。在内参与对照组选择没错的情况下,点击 gene expression 选项,选中你想查看的样品孔的基因表达情况。



       好了,这次的 RT-PCR 看图分析就到这里。最后需要注意的是图中的结果还需要输出进行后续的自行运算得出结果。图中的结果只能给出参考,但大致趋势是相同的。


       (本文转载丁香园)


上一篇:交叉电泳实验技术
下一篇:miRNA提高肿瘤免疫疗法效率

东洪简介技术平台实验方法科研成果行业动态公司新闻

留言 / LEAVE A MESSAGE

联系我们 / CONTACT US

上海展辉生物技术有限公司
地址:上海市浦东新区东方路
联系电话:400-689-6719
联系邮箱:3369352092@qq.com
联系我们: 4006896719

关注我们 / FOCUS ON


扫一扫
关注东洪博元更多动态

Copyright 2012-2017 上海展辉生物技术有限公司 版权所有
关键词: 蛋白组学 流式细胞检测 动物造模 基因测序 基因敲除  western blot 透射电镜 免疫组化 原代细胞分离 载体构建 荧光定量PCR  技术支持:汉邦传媒 

沪ICP备17013725号-2