一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取......

1、产生非特异性染色的主要因素免疫荧光染色（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合......

近年发展的时间分辨荧光测量技术以稀土离子为示踪材料，具有测量灵敏度高、操作简便、示踪物稳定、定量分析量程宽、无放射性污染和应用范围广等优点。我们采用时间分辨荧光测量技术，建立了AFP时间分辨荧光免疫分析（time-resolvedfluoroimmunoassay，TRFIA）。免疫荧光分析一、材料与方法1.材料与试剂......

自身抗体诊断的标准技术是间接免疫荧光法，其特点是特异性强，阳性与阴性样品的信号强度对比明显，通过显微镜观测能够精确地判断组织或细胞内荧光的分布。自身抗原的位置决定了其相应抗体的典型的荧光模式，所有与此典型模式不相关区域的染色被认为是非特异性染色。即使偶尔伴有强的非特异性染色，但弱......

1、一抗从4度拿出后，为什么要进行37度复温？（1）一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片；（2）另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要，但对表达较弱的抗原可能有用，4度和37度时分子运动方式不同，前者分子碰撞机率和运动速度小于后者，后者结合更快，但敏感性也提高了并易造成非特异染色。（3）其实，我更赞同后一种......

WesternBlot即免疫印迹试验，可以利用WesternBlot来比较在不同条件下，不同细胞组织中目的蛋白表达量的差异，属于定性，半定量试验。既然有差异性比较，参照物必不可少。WesternBlot试验中的标准（表达量）参照物即内参，有了参照物才能准确地比较目的蛋白表达量的差异。内参一般选用管家基因表达的蛋白，它们......

问题：我现在刚开始做石蜡切片免疫组化，具体操作过程中有些问题想要咨询一下1.脱蜡至水：二甲苯III各10分钟后100%95%85%75%酒精各多久呢(因看各个版本的介绍都不同)2.只搞一个浓度的酒精如95%时间稍微长一些可以吗？3.抗原修复：可以枸橼酸加热至沸腾再放入切片保温5-10分钟吗?冷却至室温这步可以将切......

实验外包天气渐热，心情也难免有些烦躁。这样一来WB也出鬼了，胶片上不时的出现极高的背景，整张膜上都是黑的，看上去好像是在墙壁上泼墨后留下的污渍似的。那这是跑胶的问题？还是转膜？显影？……？重复……重复……重复，再重复……直到某天早上我咬牙切齿的盯着那几条蓝色的带往下跑的时候，蓦然发现：浓缩胶漏......

免疫染色1．将膜置封闭液中，室温摇晃30～60分钟，封闭非特异性结合位点。2．用封闭液稀释特异性抗体，根据抗体的量预先确定稀释度，通常1：100～1：10000之间。将膜从封闭液中取出，置抗体稀释液中，室温摇晃反应30～60分钟。用封闭液洗涤膜4次，每次10分钟。3．用封闭液稀释结合碱性磷酸酶（或辣根过氧化物酶）的第二抗体，根据......

材料和试剂免疫荧光1.圆形盖玻片(Fisher)2.DPBS(Invitrogen)3.FBS(Atlanta)4.抗褪色封固剂:如ProLongGoldantifadereagentfromInvitrogen,withDAPI(ifneednuclearstaining)orwithoutDAPI.5.多聚甲醛(Sigma)6.常用化学试剂(Sigma)实验步骤1.让细胞生长在放入24孔细胞培养板中的圆形盖玻片上，使......

一、FITC的特性实时荧光PCR异硫氰酸荧光素（FITC）呈黄色、橙黄色或褐黄色粉末或结晶，性质稳定，在室温下能保存两年以上，在低温中可保存多年。易溶于水和酒精。最大吸收光谱为490~495nm，最大发射光谱为520~530nm，呈现黄绿色荧光，分子量为398.4.在碱性条件下（pH8.5以上），FITC的异硫酸基在水溶液中与免疫球蛋......

随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM,USA);AlexaFluor®系列(Lifetechnology,USA);DyLight系列;Cy系列;IRDye系列等等。使用最多的为AlexaFluor®系列和CFTM系列。一、CFT......