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【课题实验整体外包】-大鼠尾椎间盘不同切片方式及染色方法的组织学观察比较

目的 比较大鼠尾椎间盘不同切片方式及染色方法的优缺点,为相应的临床诊断及实验研究奠定理论基础。

方法 收集SD 大鼠尾稚间盘,制成冷冻切片及石蜡切片后,分别行苏木精-伊红染色(HE 染色)、番红-固绿染色、Masson 染色、甲苯胺蓝染色,以及针对一型胶原蛋白(typeIcollagen,COL-I)、二型胶原蛋白(type Ⅱ collagen,COL-ⅡI)和糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)的免疫荧光染色,对比观察椎间盘各层组织形态及蛋白表达的情况。

结果 在染色方法中,石蜡切片HE 染色能清晰显示各层组织;Masson 染色能清晰显示纤维环组织及髓核组织; 番红-固绿染色及甲苯胺蓝染色能较好地显示软骨各层及软骨下骨结构。冷冻切片的免疫荧光染色中,纤维环组织的胶原蛋白多为COL-Ⅰ,髓核组织中胶原蛋白多为COL- IⅡ,而GAG 多由髓核细胞及髓核样细胞分泌。

结论 观察椎间盘各层组织时,选用HE 染色及Masson染色等染色,其中石蜡切片优于冷冻切片; 观察椎间盘各种蛋白的表达及分布时,选用免疫荧光染色,其中冷冻切片优于石蜡切片。

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